公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

3、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含 6ml 培養基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養基重懸，接種 25cm2培養瓶，于 37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

收到細胞后如何操作:

1、首先，觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請及時與我司技術支持聯系。

2、用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養，隔天再取出進行觀察。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。

4、可將培養瓶內多余的培養基轉移至50ml無菌離心管中，備用；細胞傳代時，可以將該培養基按照一定比例和客戶自備的培養基混合使用，讓細胞逐漸適應培養條件。

5、確認細胞狀態良好后，應及時將細胞凍存，再進行后續的實驗，避免后期實驗失誤可能發生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失。

6、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我們技術支持溝通交流。

細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

    a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。        

     c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

     b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品：

LRRFIP1： 巨噬細胞調控相關蛋白LRRFIP1抗體 MAPKAPK5 Others Human 人 MAPKAPK5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

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LH beta： 促黃體生成素抗體 KM3, 人多發性骨髓瘤細胞 肝癌細胞,HCC-9204細胞 NCI-H292(肺癌細胞(淋巴結轉移))

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子(TWEAK)ELISA試劑盒 Rat IgM/Cy3 熒光素Cy3標記大鼠IgM 0.1ml

LIMS1： 整合素和生長因子樣蛋白1抗體 敘利亞倉鼠肌肉細胞;GH-M1

GGT2 light chain： γ谷酰轉肽酶2輕鏈抗體 SEMA4D Others Cynomolgus 食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細胞裂解液 (陽性對照)

肝動脈內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 人可替丁(Cotinine)ELISA試劑盒 Caspase-13 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13(抗原) 0.5mg

GGT5 light chain： γ-谷酰轉肽酶5輕鏈抗體 家貓肺細胞;FCA-L1 羊膜細胞，Ha Fe細胞 BaF3細胞，小鼠原B細胞株

ACVR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細胞裂解液 (陽性對照) 人可提取核抗原(ENA)ELISA 試劑盒 CD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19 0.5mg

GGT7 light chain： γ-谷酰轉肽酶7輕鏈抗體 原代神經元細胞特制基礎無血清培養基Many types of cells包裝：500/100ml

A2780+GFP人卵巢癌細胞+GFPPBX3： B淋巴細胞白血病前體蛋白轉錄因子3抗體 貓腎細胞;F81

人羊膜上皮細胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細胞 Mouse 大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)ELISA試劑盒 AFA/snoRNP/U3RNP(Human anti-fibrillarin antibody)  人抗核仁纖維蛋白抗體 人前脂肪細胞-皮下總RNAHPA-s NA

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標簽) 大鼠金屬硫蛋白1(MT1)ELISA試劑盒 15-LO/LOX(Mouse 15-lipoxygenase)  小鼠15脂加氧酶 96T

P4HB： 蛋白二硫鍵異構酶P4HB抗體 METAP1D Others Human 人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

EC9706 食管癌 大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒 HA  大鼠透明質酸 96T