公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品：

MURF3： 肌肉特定環指蛋白3抗體 AsPC-1細胞，轉移胰腺腺癌細胞 CoC1細胞耐藥亞株,CoC1/DDP細胞 人非小細胞肺癌細胞;NCI-H23

KLK6 Others Human 人 KLK6 / Kallikrein 6 / Neurosin 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠型受體α1(CHRNα1)ELISA試劑盒 Plant Vitamin D3,VD3  植物維生3 96T

EDPF1： 腸細胞分化相關因子1抗體 人神經束膜細胞RNAHPC miRNA5 μg

Tca-8113人舌鱗癌細胞 Tca-8113 human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS 大鼠信號轉導分子7(Smad7)ELISA試劑盒 ACV-A (Mouse Activin A)  小鼠活化素A 96T

RNF62： 環指蛋白62抗體 TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細胞裂解液 (陽性對照)

HDPTP： His 結構域內含酪酸0酸酶蛋白抗體 FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A CHO細胞裂解液 (陽性對照)

人上皮細胞培養基 100mL 人復制蛋白A(RPA-70)ELISA 試劑盒 EPEC/E.coli(enteropathogenic E.coli，EPEC) 普通大腸埃希菌菌體蛋白(非致病性) 1mg

HEAB： 多聚腺苷酸因子Clp1蛋白抗體 大額牛腎細胞;BFR-K1 骨髓瘤細胞，SP2/0細胞 DU145(前列腺癌細胞)

IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Ierleukin-27 人細胞裂解液 (陽性對照) 人復合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA 試劑盒 EphA1 R(Ephrin A1 Receptor) EphA1-R受體抗原 0.5mg

heavy chain cardiac Myosin： 心肌肌球蛋白重鏈抗體 CL-0050Caco-2(人結直腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2

MCF-7+luc人乳腺癌細胞熒光素酶標記PIPOX： 過氧化物酶肌酸氧化酶抗體 人海馬星形膠質細胞HA-h

VTN Protein Mouse 重組小鼠 Vionectin / VTN 蛋白 (His 標簽) 大鼠分泌型卷曲相關蛋白4(SFRP4)ELISA試劑盒 INS  大鼠胰島素 96T

prox1： prox-1抗體 DIRAS3 Others Human 人 ARHI / DIRAS3 人細胞裂解液 (陽性對照)

MKN-45 低分化胃癌 大鼠分泌型卷曲相關蛋白2(SFRP2)ELISA試劑盒 gp130(Human glucoprotein 130)  人糖蛋白130 96T

PMP2： 周圍神經髓鞘蛋白2抗體 Hs 181.Tes細胞，正常人細胞 人癌細胞,HCC1937細胞 平滑肌細胞培養基SMCM-sf