公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品：

TNFSF11 Others Mouse 小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠(Pepsin)ELISA 試劑盒 HL(Mouse hepatic lipase)  小鼠肝脂酶 96T

MTGR1： 髓易位基因相關蛋白1抗體 人少突膠質前體細胞(懸浮生長)cDNAHOPC-os cDNA

L W-3A小鼠皮下結締組織細胞 L W-3A mice subcutaneous connective tissue cells DMEM培養基+10%FBS 大鼠胃腸癌標志物CA199ELISA 試劑盒 UK  大鼠 96T

BBS6： 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0282HO-8910PM(人高轉移卵巢癌細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠尾加壓素II(Urotensin II) ELISA試劑盒 VCAM-1/CD106(Human Vascuolar cell adhesion molecule 1)  人血管內皮細胞粘附分子1 96T

Phospho-IRAK1 (Thr209)： 0酸化白介素-1受體相關激酶1抗體 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0923

NIH/3T3(小鼠胚胎細胞) 5×106cells/瓶×2 人 EVI2A 人細胞裂解液 (陽性對照) 人成骨生長肽(OGP)ELISA 試劑盒 Inhibin beta A peptide 抑制素beta A抗原 0.5mg

Phospho-IRAK1 (Thr387)： 0酸化白介素-1受體相關激酶1抗體 小鼠顆粒細胞MGC

CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒 Inhibin beta B 抑制素βB抗原 0.5mg

IRF3： 干擾素調節因子3 0.1ml

OE19人食管細胞小鼠神經干細胞 大鼠酯轉移蛋白(CETP)ELISA 試劑盒 LH(Human luteotropic hormone)  96T

phospho-PKC delta (Tyr52)： 0酸化蛋白激酶C亞性D型抗體 FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人細胞裂解液 (陽性對照)

OVCaR-3 人卵巢癌細胞 大鼠7α-羥化酶(CYP7A1)ELISA試劑盒 PS(Human Prednisolone)  人龍 96T

phospho-PKC delta (Thr505/507)： 0酸化蛋白激酶C亞性D型抗體 Y2細胞，小鼠成纖維細胞 人卵巢耐藥株,COC1/CDDP細胞 人食道上皮細胞裂解物HEEpiCL

LOXL2 Others Human 人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠24S-羥化酶(CYP46)ELISA試劑盒 LEP(Human Leptin)  人瘦素 96T